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显色底物DA-67的应用原理及使用方法

发表时间:2023-08-17

显色底物DA-67是生物体恒量组分分析检测中的中间代谢物,它的CAS号为:115871-18-6,德晟生产的外观是白色的粉末,值得注意的是它的储存对温度是有要求的,需要在2-10℃的条件下保存,所以在常温情况下运输的话,需要放置冰袋并使用泡沫箱进行包装。

 

DA-67的应用原理

DA-67与过氧化物酶配合使用时,可以展现出对过氧化氢的高敏锐度,它是一种水溶性氧化显色试剂。相比传统的显色试剂来说,它不但具有吸光度低、灵敏度高的特点,更值得一提的是,相比其他的德晟显色试剂DA-67的水溶性要好,以1 mmol/L以上的浓度,10毫克可溶于25毫升的水中。同时兼容了以上几个优点,需要用简单的比色法就能较快的获取结果,大大的加大了检测效率,所以DA-67常用于生物成分样本分析中。


二、DA64-DA67的使用说明

1.制备显色溶液  

① 把4.08 mg DA67和1 mL100 units/mL的过氧化物酶(POD)放到配置的的PIPES缓冲剂中溶解,定容溶液至100 mL(DA67 100 μmol/L溶液);

② 将上述制备的溶液3 mL与10 μL样本溶液(H2O2:0~5 mmol/L)混合,37°C条件下培育5分钟;

③ 用分光光度计检测666 nm处的吸光度,以空白(用蒸馏水替换样本溶液混合成的溶液)的吸光度差作为检测值,用单独制备的校准曲线确定样本中的含量。


2.制备检测POD活性的显色溶液

① 把4.08 mg DA67和1 mL H2O2(2%)加到配置好的Mcllvaine缓冲液中溶解(PH值5.7),定容至100 mL;

② 将上述制备的溶液2 mL与2 mL样本溶液(1 fmol~1 pmol/tube POD)在37°C下孵育;

③ 用分光光度计检测666 nm处的吸光度,以减去空白的吸光度差作为检测值,用另外制作的校准曲线即可确定样本中的含量数值。


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