吖啶酯标记蛋白效率计算方法
1,取100μL 待测样品,稀释至Abs280在0.1~1.5之间;
2,向1中加入少量盐酸,调整至pH=1~2,使其形成具有黄色特征的盐溶液,吸收峰在367nm;
3,分别测试待测样品的Abs280nm 和Abs367nm ;
4,Equation1: 吖啶酯浓度(mol/L)=Abs367/14650 ;
5,校正蛋白Abs280数值;
Equation2: Abs280(校正后) = Abs280- (Abs367×0.17);
6,准备1mg/mL未标记的蛋白溶液(e.g. 50ug 蛋白加入50μL 标记缓冲液),取出10μL 并补加490μL ddH2O (稀释50倍)。读取Abs280nm ,并乘以稀释倍数。
7,计算蛋白质量浓度:
8,计算F/P摩尔比