在生物实验中会经常被用到,它们种类繁多,可能你需要的缓冲剂和你选的缓冲剂表面符合,实际使用时就存在一定的差异,所以选好合适的缓冲剂是很有必要的;同时,不同缓冲液差别也很大。德晟带你来聊聊Tris-HCl缓冲液与HEPES缓冲液的之间的区别。
Tris-HCl缓冲液
是在生物化学研究中使用较广泛的一种缓冲剂,其本身为弱碱,常用有效pH在“中性”范围,Tris-HCl缓冲液:pH=7.5~8.5;Tris-磷酸盐缓冲液:pH=5.0~9.0。
优点
1、 Tris-HCl缓冲液稳定,与生理体液的相容性好(Tris-HCl与钙、镁离子不会形成沉淀;相反,磷酸盐与钙、镁离子会产生沉淀);
2、而且相同PH,相同浓度的Tris-HCl缓冲液的离子强度低,这对酶类测定尤为重要,因为大离子强度易致有些酶失活。因此,有时用Tris-HCl代替磷酸盐缓冲液,效果更好。
Tris-HCl缓冲液缺点:
1、温度效应大,如4℃时pH=8.4,37℃时pH=7.4
2、pH值受溶液浓度影响较大,稀释十倍,pH值的变化大于0.1;
3、对某些pH电极发生一定的干扰作用,所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。
4、易吸收空气中的CO2,所以配制的缓冲液要盖严密封。
HEPES缓冲液
HEPES是一种非离子两性缓冲液,其在pH7.2~7.4范围内具有较好的缓冲能力,常用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。
优点:
pKa值介于6.0和8.0之间;
在水中具有高溶解度;
具有膜不透性,不易穿透生物膜;
对生化反应影响有限,可耐化学和酶解作用,且不与金属离子生成复合物或沉淀;
有极低的可见光和紫外光吸收;
离子浓度、溶液组成和温度对解离的影响小;
HEPES缓冲液缺点:
如果将HEPES水溶液暴露于环境光下三小时,会产生细胞毒性的H2O2;
HEPES水溶液必须远离光线以免影响实验结果;
而配置成溶剂后,要在4℃下保存,建议在短期内使用效果更佳;
HEPES粉末放置的时候一般放于干燥的室内,不能直接长时间照射阳光。