作为生物缓冲剂家族中的中流砥柱,是合成Bis-Tris,TES,TAPS中是必不可少的反应物。后面几种均为生物化学实验和分子生物学实验中经常使用的缓冲剂,他们结构中都含有Tris的分子结构。下面我们来列举tris和以他合成的Bis-Tris这两种常用化学物质的应用场景,浅析它的优越化学性能。
三羟甲基氨基甲烷(行业常称作Tris),25°C下其pKa为8.04,缓冲范围7.0~9.0。其常用实验如下:
(1)常用于凝胶电泳缓冲液中,例如TAE或TBE;
(2)常用于制备Laemmli缓冲液;
(3)常与甘氨酸和SDS一起制备运行缓冲液和上样缓冲液;
(4)可以用作阴离子交换层析中的结合缓冲液和洗脱液;
(5)被用作RNA杂交和DNA裂解的缓冲液。
在Tris的使用中,需要注意:Tris缓冲液的pH值受温度和浓度影响很大,我们在配制过程中要特别注意应用环境的影响因素;Tris的伯胺基在特定条件上与多种分子发生反应,包括RNA抑制剂,常见金属如Ag+,Co2+和Cu2+等,酶,Tris不适合喹啉甲酸测定。
Bis-Tris,双(2-羟乙基)氨基(三羟甲基)甲烷,两性阴阳离子缓冲剂,25°C下pKa为6.46,pH缓冲能力范围为5.2~7.8。其应用领域如下:
(1)作为各种类型电泳的样品缓冲液,凝胶缓冲液和储存保质缓冲液;
(2)作为阴离子交换色谱法中的缓冲液;
(3)被用于卤代烷烃脱卤酶结晶过程的X射线晶体学研究;
(4)低导电性和高灵敏度,是核磁共振光谱的有效缓冲液;
(5)与人肝脏型脂肪酸结合蛋白(FAB)相互作用并影响蛋白质动力学。
Bis-Tris与Fe3+和Cr3+形成络合物,与许多常见金属形成络合弱复合物,因此在含有金属离子的溶液中使用时,应考虑其络合因子的范围。此外,在有系统压力变化的反应釜,可使用Bis-Tris缓冲溶液。Bis-Tris是二甲基胂酸盐的替用品以避免其高毒性,但同样不喹啉甲酸测定。
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