直接化学发光与酶促化学发光比较
随着测定技术的发展,其中在标记抗体时会使用化学发光免疫测定,它主要是以化学发光剂,或酶物质催化发光,当标记抗体后,发光底物在受到催化物或发光剂的作用后,产生反应,从反应中就会释放可见光,用于检测。从反应原理来看,化学发光测定技术主要分为化学发光和酶物质催化发光,那这两种区别是什么呢?接下来,具体给大家分析一下。
直接化学发光
其实顾名思义就知道它是不需要任何酶的催化作用,直接参与发光,在结构上,它们有着自身特有的发光基团,可直接用来标记抗原抗体,具有速度快,稳定性强的特点,常见代表性发光剂有吖啶酯。
吖啶酯不需要任何催化剂,发光反应过程中干扰因素少,且光速效率高,强度大,可快速集中,标记物质稳定,常在2-8度的温度条件下可保存数月。
酶促反应化学发光
主要是利用酶物质,需要它进行催化,才能促使发光,自身不带有发光基团,虽然有一定的灵敏度,但发光速度较慢,酶的活性容易受外界干扰,其代表性的试剂有鲁米诺及其衍生物或异鲁米诺。
鲁米诺及其衍生物的激活酶是利用辣根过氧化物酶,鲁米诺发光信号较弱,为闪光型,如果有增强剂的辅助,可将发光时间延续到30s到1分钟,发光强度也会增强。
现在通常是用辣根过氧化物酶标记抗原抗体,以鲁米诺或异鲁米诺及其衍生物作底物,加入增强剂,用氢氧化钠和过氧化氢作发光启动试剂,发光反应2分钟后,光反射强度可以达到顶峰。
异鲁米诺则是在鲁米诺的基础上进一步改良,用于新产业的化学发光试剂,使用的是闪光非酶激活技术,加入启动液后测试0.1-3s时间内的发光强度。
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