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在不同的实验中该如何选择合适的生物缓冲液

发表时间:2021-10-25

为实验选择合适的生物缓冲液可能很棘手。这个过程就像玩“猜猜谁”。像游戏一样,您从非常广泛的缓冲剂列表开始,然后慢慢地提出问题和研究答案以缩小选择范围。到目前为止,您已经了解了很多关于的知识,并且正在寻找更多有关此小游戏的指南。在本文中,将会介绍在选择生物缓冲剂时您应考虑的事项。 

步骤1:确定实验的pH

在许多实验中,您需要更改条件以使蛋白质在溶液中保持满意状态。举例来说,假设您在pH 7.4的条件下进行了模拟生物条件的实验,但是您的蛋白质在此pH值下不稳定,因此您需要优化这种情况。要记住的一件事,目标pH值通常离蛋白质等电点(pI)大约一个pH单位(有时稍远)。pI是给定的分子或蛋白质不带净电荷的pH值。当蛋白质达到其pI时,它的溶解度就不会那么高。

步骤2:提出正确的问题

就像游戏一样,您必须提出正确的问题,以确保获得正确的缓冲。在这里还是要重点介绍一些重要的问题:

1.溶液中是否存在可能与缓冲液络合的金属?

2.您的目标蛋白是一种酶吗?它属于哪一类?

3.配体结合,蛋白质稳定性或电泳的离子强度要求是什么?

4.现有哪些文献告诉我建议的缓冲剂与所用系统的相互作用?

所有这些问题,将进一步帮助您找到最适合实验的缓冲剂。 

步骤3:考虑下游实验

研究人员经常遇到的一个绊脚石是,发现选择的缓冲剂不适用于下游应用。例如,已知Tris会对布拉德福德分析产生负面影响。其他生物缓冲液会对质谱产生负面影响。或许您可能已经缩小了缓冲区的范围,只是发现它在将来可能无法很好地工作。这就像“猜猜谁”的噩梦般的版本。在这种情况下,您必须进行一些研究以找到合适的替代方法。但是,既然您已经缩小了所需的特征,那么进行这项研究就会容易一些。

步骤4:寻找合适的缓冲剂

太好了,现在您确切知道要使用什么缓冲剂了,到了采购环节,对于大多数研究人员而言,底价和纯度基本上是在购买缓冲液的重要标准。当然,您可以去找比较有名的企业,咨询这个企业在业内的口碑。在这里推荐一家企业,不仅提供出色的缓冲剂产品(TRISHEPES、BICINE、CAPS等热门产品)。而且还提供了出色的内容和服务支持,可帮助您进行实验,重要的是,价格相对其他厂家更具竞争力。

 

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