1. 基本性质
吖啶类化合物应用于化学发光检测具有以下优点:
① 背景发光低,信噪比高;
② 发光反应干扰因素少;
③ 光释放快速集中、发光效率高、发光强度大;
④ 易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少;
⑤ 标记物稳定(在2-8℃下可保存数月之久),它们在水中溶解性好,稳定且不易水解。
吖啶类化合物化学发光不需要催化剂,在有H2O2 的稀碱性溶液中即能发光。化合物的发光为闪光型,加入发光启动剂后一般0.5s 左右发射光强度达到zui大,半衰期为1s左右。
吖啶类化合物应用于化学发光免疫分析(CLIA)。即用吖啶盐标记抗体或抗原,用HNO3+ H2O2 和NaOH 作发光启动试剂。有些在发光启动试剂中加入Triton X-100,CTAC,Tween-20等表面活性剂以增强发光。
吖啶类化合物常用于环境分析、免疫分析、酶活性分析和标记寡核苷酸片段等,在临床上用于测定细菌、病毒或其它疾病标志物。
2. 吖啶酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS
或NSP-DMAE-NHS是一种理想的化学发光免疫分析标记物质,具有良好的发光性能。与目前广泛使用的吖啶酯AE-NHS相比,吖啶酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS与抗体(Ab)偶联物的发光强度更高,吖啶酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS为1.03′107cps/ng,而AE-NHS为1.0′105cps/ng Ab,两者的发光动力学性质很相似,都为闪光型发光且都 是在0.4s时达到zui高,但DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS的热稳定性较AE-NHS显著提高,AE-NHS只在酸性溶液中稳定,当pH>6.3后易水解,而DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS则不然,如在室温下,在pH为7.0的PB缓冲液中很稳定,16天后,发光活性只降低3.6%。它们与蛋白偶联物的发光热稳定性情况与此相似。
吖啶酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS易于标记生物分子且标记后化合物的发光活性及生物活性稳定,以所合成的为发光标记物应用于化学发光免疫分析具有很高的灵敏度和其它理想的方法学指标,如对TSH的最低检测限达0.007 mIμ/L。因此,吖啶酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS对于研究化学发光分析以及化学发光免疫分析均具有很好的应用价值。
3. 吖啶磺酰胺NSP-SA-NHS
是一种非常有效的化学发光免疫分析标记物质,它具有空间位阻大,水解稳定性好,热稳定性和信噪比高等性质。它的光量子产率也优于吖啶酯AE-NHS。应用于直接化学发光分析及化学发光免疫分析等具有许多优点。
吖啶磺酰胺NSP-SA-NHS化学发光不需要催化剂,在有H2O2的稀碱性溶液中即能发光,具有许多优越性,特别是无须一个催化过程,也不需要增强剂,从而降低了背景发光,提高了信噪比,干扰作用少。该类化合物作为化学发光免疫分析的发光标记物,还具有其它方面的优点,如光释放快速集中、发光效率高、发光强度大,易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少、标记物稳定,在2-8℃下可保存半年以上。
吖啶磺酰胺NSP-SA-NHS的稳定性较吖啶酯类如AE-NHS高,其原因是由于C-N键与C-O键的键级不同,C-N键大于C-O键。吖啶酰胺类化合物抵抗水解的能力也强于吖啶酯类化合物。