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缓冲剂HEPES、PIPES的制备及注意事项

发表时间:2021-06-10

HEPES

是两性离子Good's缓冲液,在6.88.2pH范围内有效。这使HEPES在生理pH值下成为有效的缓冲液。该缓冲液可用于多种生物的细胞培养基中。它也可用作蛋白质研究中的结合缓冲液,用于阳离子交换洗脱实验中,以及在凝胶电泳中用作运行缓冲液。

HEPES的制备步骤:

要制备11M HEPES缓冲溶液,请将238.30 g  HEPES溶解 750 mL中。使用10N氢氧化钠调节至所需的pH

注意事项:

HEPES可溶于水,价格便宜,并且通常具有生物惰性。但是,它确实参与了产生自由基的氧化还原反应,并干扰了DNA和限制性内切酶之间的反应,但是由于空间位阻,其干扰程度小于Tris。同样重要的是要注意,当使用异质连接蛋白通道时,不应使用HEPES,因为它会抑制其功能。

PIPES

是哌嗪缓冲液家族的一员,与HEPES属于同一家族。它是两性离子Good's缓冲液,在6.17.5pH范围内有效。由于pH范围与HEPES略有不同,PIPES的浓度仅为HEPES浓度的一半。该缓冲剂不会与金属络合,因此可用于含金属离子的溶液。

PIPES的制备步骤:

要制备11M PIPES游离酸缓冲溶液,请将302.37g  PIPES游离酸添加到600 mL 中。使用10N氢氧化钠调节至所需的pH值。

注意事项:

直到溶液的pH值升高到6.5以上时,PIPES的游离酸才容易溶解,但是PIPES的钠盐很容易溶解。如果使用的是游离酸形式的缓冲液,请使用氢氧化钠将其转化为钠盐,以提高在较低pH下的溶解度。像HEPES一样,PIPES不适用于涉及氧化还原反应的实验,因为它会导致自由基的形成。

 

 

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