Tris(三羟甲基氨基甲烷)是生化实验中最常使用的缓冲液,因为它有极佳的缓冲能力、毒性低、对生物反应的干扰极低,而且纯度很高。有超过磷酸盐的趋势,如在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中都已开始实验TRIS缓冲液,很少再用磷酸盐。在分子生物实验中使用也很广泛。
1、的应用
① 在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系稳定P值;
② 在凝胶中使用TRIS-HCL缓冲体系稳定PH值;
③ 被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂;
④ TRIS缓冲液的低离子强度特点还可用于线虫的中间纤维的形成;
⑤ 在TRIS盐酸缓冲液中加入EDTA制成“TE缓冲液”,可用于DNA的稳定和储存;
⑥ 将调节PH值的酸溶液换成乙酸,获得“TAE缓冲液”,换成硼酸可获得TBE缓冲液。这两种溶液常用于核酸电泳实中。
2、使用缓冲液的注意事项
① TRIS缓冲液的PH值容易受温度的影响,所以在配置的过程中注意环境温度;
② 缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大,缓冲液稀释十倍,pH值的变化大于0.1,常配成pH值为6.8,7.4,8.0,8.8;
③ Tris在一定程度上与各种分子反应,包括RNA酶抑制剂,醛,酶,DNA以及常见金属如Cr3+,Fe3+,Ni2+,Co2+和Cu2+等,可以和重金属一起作用,但在有些系统中也起抑制作用;
④ 对某些pH电极发生一定的干扰作用,需使用与Tris缓冲溶液具有兼容性的电极;
⑤ Tris不适用于二喹啉甲酸(BCA)测定;
⑥ 易吸收空气中的CO2,所以配制的缓冲液要盖严密封;
⑦ 它可以和重金属一起作用,但在有些系统中也起抑制作用;
⑧ 吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害,操作时需戴好手套和护目镜。
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