法CLIA和实时荧光定量PCR(qPCR)都是病毒检测中常用的方法,不同的检测方法得出的检测结果可能会有一定的差异,下文将两种方法检测肝癌患者血清的结果作对比。
化学发光法CLIA:
化学发光免疫分析就是将免疫反应和化学发光反应相结合,藉以检测抗原或抗体的技术。常用的发光物质或发光试剂有吖啶酯和鲁米诺等,将发光物质或酶标记在抗原或抗体上,免疫反应结束后,加入氧化剂或酶底物而发光,通过测量发射光强度,根据标准曲线测定待测物的浓度。
化学发光与qPCR检在肝癌诊断中的对比
qPCR法:
实时荧光定量PCR是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法,通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析。PCR扩增过程中,通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据。
分析化学发光法和实时荧光定量PCR法检测肝癌患者血清中的EB病毒载量,探讨EB病毒在肝癌检测中的意义。
以化学发光法和qPCR对正常对照组、乙肝组、丙肝组及肝癌组患者血清中的EB病毒载量进行检测,并将两种检测结果进行对比分析。对比结果 :
化学发光检测肝癌组患者EB表达水平为1.99,均显著高于乙肝(1.25,u=5.129,P<0.05)、丙肝(1.31,u =4.497,P<0.05)、正常组(0.03,u=10.927,P<0.05);实时荧光定量PCR方法检测肝癌组患者的EB表达水平为1.89,高于乙肝(1.26,u=5.295,P<0.05)、丙肝(1.32,u=4.983,P<0.05)及正常组(0.04,u=11.394,P<0.05),差异具有统计学意义;
肝癌患者术前EB表达水平(化学发光:1.87;实时荧光定量PCR:1.85)明显高于术后(化学发光:0.03,u=12.873,P<0.05);实时荧光定量PCR:0.04,u =11.936,P<0.05),差异具有统计学意义。两种检测方法结果无统计学差异(P>0.05)。
结论:化学发光法和荧光定量PCR具有特异性强、灵敏度高等优点,都可以用于检测肝癌的早期诊断和分期。其中德晟的研发方向是以鲁米诺、吖啶酯作为发光试剂的化学发光免疫分析。