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吖啶酯在标记核酸上的用途

发表时间:2020-09-27

,黄色粉末,CAS号:194357-64-7,是一种重要的化学发光试剂,的化学发光量子产率比鲁米诺高,而且吖啶酯标记条件温和,标记率高,标记后不影响分离除此之外,吖啶酯的化学发光过程反应迅速,本底低,在氢氧化钠和过氧化氢的存在下即可发光。在氧化反应过程中,结合物被分解,不影响游离吖啶酯的发光;另外,吖啶酯类化学发光试剂具有较好的稳定性,易于储存。 

吖啶酯除了在免疫测定中的应用之外,还可以标记寡核苷酸片段探针应用于基因测定或微生物测定。吖啶酯化合物很适合于标记DNA链以制造化学发光DNA探针。现代医学研究成果表明,许多疾病如癌症和遗传疾病的发生都与DNA的突变有关,且许多传染性疾病是由环境中的病毒、病菌或寄生虫引起的,对病毒特定序列DNA的分析有利于疫情的控制。对DNA序列以及其链中碱基突变的检测在基因筛选、遗传疾病早期诊断和治疗、病原基因测定方面具有十分深远的意义。

在核酸杂交分析中,制备特异性强、灵敏度高的标记探针是核酸杂交分析成功的关键,吖啶酯衍生物可以直接标记在核酸探针上,不需催化剂且发光量子产率不受影响;另外,在一定条件下,未杂交的单链DNA上标记的吖啶酯被水解破坏,只有杂交形成的双链保护的吖啶酯才能产生化学发光,不需分离即可监测整个杂交过程。

一种吖啶酯标记核酸的方法,所述方法包括以下步骤:

(1) DNA探针5’端、3’端保护;

(2) 吖啶酯标记:25mM NHS吖啶酯溶解于DMSO中,配置1M HEPES缓冲液(PH=8.0) ,按照摩尔比核酸探针:NHS吖啶酯=1:5的条件,加入到HEPES缓冲液中,37℃反应1h;

(3) HPLC纯化。所述步骤(1) 中DNA探针5’端3’端保护具体包括:采用三氟硫代乙酸S-乙酯,对5’端-NH 2进行保护;采用三氟硫代乙酸S-乙酯,对3’端-NH 2 进行保护。

德晟科技在12年就一直在研发化学发光试剂,研制成功后投入市场得到了客户的普遍认同。研发生产的吖啶酯有6种不同基团的产品,化学发光试剂除了吖啶酯还有鲁米诺、异鲁米诺。吖啶酯系列的发光效率较高,属于直接发光。


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